Zastosowanie kolumn chromatograficznych do oczyszczania antybiotyku ze śladowych zanieczyszczeń

Chromatografia Flash to szybka, kolumnowa technika rozdziału powszechnie stosowana do oczyszczania antybiotyków po syntezie lub izolacji z matryc biologicznych. Polega na przepuszczaniu próbki przez napełnioną sorbentem (najczęściej modyfikowany krzemionkowy C18 lub normalno-fazowy w zależności od polarności związku) kolumnę pod zwiększonym ciśnieniem, przy jednoczesnym gradiencie rozpuszczalników, co pozwala na selektywne elucjonowanie substancji. Optymalizacja obejmuje dobór fazy ruchomej (np. mieszaniny acetonitrylu/wody z buforem lub heksan/eter dla związków niepolarnych), szybkości przepływu, oraz frakcjonowania przy użyciu detektorów UV (typowo 210–280 nm) lub detekcji masowej dla złożonych mieszanin.

Chromatografia Flash pozwala szybko uzyskać antybiotyk o wysokiej czystości, ale przy skalowaniu warto uwzględnić koszty sorbentu i zużycie rozpuszczalników oraz potencjalne problemy z degradacją termiczną lub hydrolyzą wrażliwych związków.

Poniżej przykład oczyszczania związku X z mieszaniny reakcyjnej:

Związek X pochodzenia naturalnego, po wstępnej izolacji z surowca. Próbka nie posiada chromoforów widocznych w dostępnym zakresie detektora UV-Vis, co wymaga zastosowania detektora rozpraszania światła (ELSD).

Kolumna: SepaFlash 4 g z nieregularnym żelem krzemionkowym (S-5101-0004)

Ilość próbki: 250 mg

Przepływ: 30 mL/min

Detekcja: 254 nm, 280 nm, ELSD

Rozpuszczalnik: heksan/octan etylu

Uzyskany chromatogram z sygnałem z detektora ELSD

Powiększenie chromatogramu ukazujące zanieczyszczenie, które należało oddzielić

Kolumny SepaFlash są rozwiązaniem zapewniającym rozsądny balans pomiędzy jakością i ceną. Dostępne są zarówno wypełnienia niemodyfikowane nieregularne i regularne/sferyczne, jak i żele krzemionkowe z grupami funkcyjnymi C4, C8, C18, C18(AQ), NH2, Diol, Phenyl, Phenyl-Hexyl, ARG, CN, SAX, SCX, kolumny do rozdziału kannabinoidów i kolumny z Al2O3/tlenkiem glinu (kwasowym, obojętnym, zasadowym).

Aby jeszcze bardziej obniżyć koszty rozdziałów, można skorzystać z wielorazowych kolumn iLok do samodzielnego napełniania krzemionką, które można składać bez wykorzystania dodatkowych narzędzi.

Oferowane kolumny posiadają złącza Luer-Lock, przez co pasują praktycznie do każdego dostępnego na rynku chromatografu Flash.